PROPAGACIÓN DE AGUAJE A PARTIR DE EMBRIONES CIGOTICOS

05 diciembre 2009

Medio de cultivo
•    Los embriones fueron sembrados en un medio de cultivo Woody Plant Media (WPM), haciendo ensayos previos en medio de cultivo Murashige & Skoog ½ cc. + 10% de agua de coco, liquido sin carbón

Procedimiento 

Extracción de semilla.

Obtenidos los frutos se procedió a:

• Cortar el epicarpio longitudinalmente, con  la ayuda  de un cuchillo
• Abrir con los dedos de la mano para la extracción del endosperma. 
• El endosperma extraído se coloca en vaso precipitado con agua de caño, para evitar la oxidación.
• Lavar, enjuagar con agua corriente y acondicionar en una placa estéril mediante una cámara húmeda por un lapso de 24 horas, con el fin de hidratar los endospermos y facilitar los cortes. 

Desinfección de las semillas. 

Para la desinfección de las semillas se procedió a:

•  Se introduce el vaso precipitado con las semillas  a la cámara de flujo laminar, sin agua.
• Luego se agrega una solución de hipoclorito de sodio al 0.5% por un lapso de 10 minutos.
• Desechar la solución desinfectante al frasco colector.
• Realizar 6 enjuagues con agua destilada estéril (Tº 11ºC)  por un lapso de 3 minuto, con la finalidad de liberar moléculas de la solución desinfectante de la superficie de las almendras.

Disección y separación de embriones

Para este procedimiento se debe tener bastante cuidado de no dañar estructuras del embrión, situados en el interior de las semillas, teniendo esto como recomendación se procedió a:  

• Acondicionar una pequeña lamina de agua destilada estéril al interior de una placa petri, para la recepción de embriones con la finalidad de evitar la deshidratación de los mismos.
• Con la ayuda de la pinza puntiaguda sostener la semilla y con el bisturí extraer el embrión  
• Con la ayuda de la pinza grande y un bisturí destapar una tapa de la almendra.
• Con el bisturí y con cuidado levantar el embrión y disponerlo sobre la lámina de agua estéril contenida en la placa petri.

Siembra de embriones
Este procedimiento es bastante sencillo, pero se debe tener cuidado en evitar la contaminación en ellos.

Para efectuar una buena siembra se procedió a:

•  Destapar el frasco que contiene el medio de cultivo.
• Con la ayuda de la pinza grande recoger y sembrar el embrión acondicionándolo suavemente en la superficie del medio de cultivo, colocando dos (2) embriones por frasco.
• Posteriormente tapar, rotular tomando como datos la fecha de siembra y transferirlo al área de incubación.